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细胞系质量检测技术服务
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中国药典要求对细胞系进行检定,NMPA、FDA、EMA、世界卫生组织(WHO) 和人类用药注册技术要求协调国际会议(ICH)的各种法规文件概述了对细胞库检定的要求和指导,以确认细胞的起源和历史,并鉴定和测试细胞的身份,稳定性和纯度。

细胞检定主要包括几个方面:细胞鉴别、无菌检查、支原体检查、内外源病毒因子检查、成瘤性/致瘤性检查等。

这些检测项目对于 MCB 细胞和 WCB 细胞及生产限定代次细胞均适用。

我们建议在药物生产的各个阶段对哺乳动物和非哺乳动物细胞系进行检定,包括:

主细胞库(MCB) 工作细胞库(WCB) 生产终末细胞(EOPC) 病毒种子库(VSS) 原材料及最终产品

细胞系检测

细胞鉴别试验

  新建细胞系/株、细胞库和生产终末细胞应进行鉴别试验,以确定为本细胞,且无其他细胞的交叉污染。珈创生物提供多种鉴别试验,客户可选择一种或多种方法对其细胞系/株进行种属鉴别。

染色体核型分析

  核型分析的结果可以确认样品的细胞系身份和来源物种。我们拥有多种细胞(包括人源细胞,人源干细胞,猴 Vero,仓鼠 CHO)核型细胞分析的丰富经验。

  染色体核型分析包括但不限于:中期染色体 G 显带分析和染色体计数(提供二倍体染色体数,频率分布和多倍体水平)。

同工酶试验

  对细胞乳酸脱氢酶(LD)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)和核苷磷酸化酶 (NP)三种酶分别进行凝胶电泳试验,并通过与指示细胞对比,确定有无交叉污染。

短串联重复序列分析(STR)

  STR(短串联重复序列)分析法即通过提取样品 DNA,PCR 扩增 STR 位点, PCR 产物检测,检测结果分析,并与 ATCC 和 DSMZ 数据库进行比对,以确定样品种属来源,判断其是否存在其他人源细胞交叉污染。

无菌检查

  参考中国药典通则 1101,提供符合法规要求的薄膜过滤法和直接接种法。无菌检查均在 A 级隔离器或 C+A 级环境中进行,且在检测过程中持续进行环境监测。

适用性检查:均可按照法规的要求,对不同的供试品进行适用性试验。 以确认所采用的方法适合供试品的无菌检查。

薄膜过滤法:采用封闭式薄膜过滤器,可过滤大量供试品以及利于解决供试品中可能存在微生物生长抑制剂等问题。是可过滤供试品首选的检测方法。

直接接种法:适用于无法用薄膜过滤法进行检测的供试品,包括混悬液等非澄清水溶液、固体供试品、非水溶性供试品和灭菌医疗器械等。

分枝杆菌检查

  珈创生物参考中国药典通则 1101,采用 Middlebrook 7H10 平板培养法,提供符合法规要求的分枝杆菌检查。检查均在A级隔离器或C+A级环境中进行,且在检测过程中持续进行环境监测。

支原体检查

  珈创生物参考中国药典通则 3301,提供符合法规要求的支原体检查包括培养法和指示细胞培养法(DNA 染色法)。

培养法:供试品分别接种固体和液体培养基,于接种一周后取液体培养基转种进行次代培养,观察初代培养和次代培养结果。

指示细胞培养法(DNA 染色法):供试品接种于对照细胞,培养 3-5 天后传代再培养 3-5 天,于培养期末进行染色观察。

内外源病毒污染检查

  检查细胞系/株中是否有来源物种中潜在的可传染的病毒,以及由于使用的原 材料或操作带入的外源性病毒。细胞进行病毒检查的种类及方法,须根据细胞种属来源、组织来源、细胞特性、传代历史、培养方法及过程等确定。 在您开展检测前,珈创愿意与您进行充分的沟通,确定合适的检测方案。

细胞形态观察及血吸附试验

体外不同指示细胞接种培养法

动物体内接种法

乳鼠脑内及腹腔接种法

小鼠脑内及腹腔接种法

豚鼠腹腔接种法

家兔皮内及皮下接种法

鸡胚接种法

鸡胚卵黄囊接种法

鸡胚尿囊腔接种及尿囊液血凝试验

逆转录病毒检测

逆转录酶活性测定法 PERT

感染性试验

透射电镜观察法

种属特异性外源病毒因子检测

应根据细胞系/株种属来源、组织来源及供体健康状况等确定检测病毒的种类。

鼠源细胞系

鼠源病毒检查

人源细胞系/株

人源病毒检测Q-PCR法

牛源性病毒检测

细胞培养法

荧光抗体检测法

猪源性病毒检测

细胞培养法

普通PCR法

Q-PCR法

其他特定病毒检测

鼠细小病毒检测

细胞培养法

普通PCR法

Q-PCR法

杯状病毒(Vesivirus 2117)检测--Q- PCR法 CHO细胞系

成瘤性检查

动物体内接种法(裸鼠)

软琼脂克隆形成试验