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干货 | qPCR 实验中关于 CT 值问题的详细攻略(中)

作者:admin      发布时间:2019-11-08 13:55:12      阅读次数:14

NTC(无模板阴性对照)出现 CT 值,目的基因的 CT 值还能使用吗?


NTC(无模板阴性对照)出现扩增一般会有两种情况:


(1)通过观察融解曲线,NTC 与目的基因融解曲线峰形不重叠。一般 NTC 的 Tm 值较目的基因 Tm 值小。


image.png


这种情况下,NTC 的 C值是由引物二聚体造成的,并不影响目的基因 C值的采集。


(2)NTC 与目的基因融解曲线峰形重叠。NTC 的 Tm 值等于目的基因的 Tm 值。


image.png


这种情况下,说明体系已被气溶胶污染了。那么,体系被污染,目的基因的 C值还能正常使用吗?


需要计算目的基因的 C值与 NTC 的 C值的差值(△CT)来判定。


若 △C≥ 5,说明气溶胶带来的污染对体系影响非常小,可以忽略不计。


如果达不到 △C≥ 5 的程度,△C≥ 3 也可以认为气溶胶的污染程度很低,目的基因的 C值可正常使用。


若 △C< 3,说明污染已经很严重了,目的基因的 C值是不能使用的。


未完待续...

转自:诺唯赞

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